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天冬氨酸-β-半醛脱氢酶突变体及其应用

本发明涉及天冬氨酸-β-半醛脱氢酶(ASADH)突变体及其应用。本发明提供了能有效地利用 NAD(H)的 ASADH突变体,其能用于构建 NAD(H)依赖性型的天冬氨酸家族氨基酸合成途径,从而可解决工程菌中辅因子不平衡的问题。

发布人:华东理工大学
标签: 微生物工程  
发布时间:2017-12-26 16:44
高产L-赖氨酸的生产菌株及其应用

本发明提供一种天冬氨酸激酶:(a) 其氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示;或(b) 包含(a)所限定的序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的序列,且基本具有(a) 所限定多肽功能的由(a)衍生的多肽。本发明的天冬氨酸激酶能有效生产L-赖氨酸,并且抗L-赖氨酸负反馈抑制的能力高。本发明还提供包含编码所述天冬氨酸激酶的基因的重组宿主以及利用所述宿主或天冬氨酸激酶产生L-赖氨酸的方法。本发明的天冬氨酸激酶或包含本发明天冬氨酸激酶的宿主细胞还用于产生苏氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸或缬氨酸。本发明还提供利用所述天冬氨酸激酶或宿主细胞产生L-天冬氨酰-4-基磷酸的方法。

发布人:华东理工大学
标签: 微生物工程  
发布时间:2017-12-25 16:32
微生物发酵法生产稀有人参皂苷技术项目

1,原理: 人参皂苷是由苷元和糖基相连而成的三萜糖苷类化合物。根据苷元不同,人参皂苷可分为3种类型:齐墩果烷型、人参二醇型和人参三醇型皂苷。苷元糖基化后可产生不同的人参皂苷。在人参皂苷合成中参与糖基化的糖基转移酶,其作用是把糖基供体上的糖基转移到皂苷元的C-3、C-6或C-20的羟基上,从而形成具有不同药用活性的皂苷。 本项目经过深入的挖掘,找到了多种人参皂苷生物合成中高效且特异的酶,在此基础上,基于合成生物学的方法,将合成人参皂苷的生物途径构建到酿酒酵母中并进一步优化其结构,从而得到了可高效生产人参皂苷及苷元的酿酒酵母工程菌株。本项目可以以单糖为底物一步发酵生产皂苷元(如原人参二醇、原人参三醇、齐墩果醇、香树脂)及稀有人参皂苷(如Rg3、Rh2、CK、F1、Rh1、Rf、Rg2等),也可以皂苷元或便宜易得的人参皂苷为底物发酵生产高价值的稀有人参皂苷。 2,关键技术指标: 本项目目前已有多个产物完成了10L发酵罐的发酵试验。96小时发酵时间内, 原人参二醇产量可达到11 g/L,纯度>99.9%; CK产量达到3 g/L,纯度>99.9%; Rh2产量达到2 g/L,纯度>99%; Rg3、Rh1、F1的产量均大于2 g/L。 需要指出,目前的发酵产量还有很大的提升空间,10L水平的产量保守估计至少有一倍以上的提升潜力。其他种类的人参皂苷和苷元目前虽未做10L水平的发酵试验,但如需要也应可在短期内达到或超过上述水平。 10L水平发酵的原料成本目前为5元左右/克产品。 技术优势: 1,在酵母中建立起生物合成人参皂苷元的平台技术,可在此基础上进一步生产多种稀有人参皂苷,产品包括皂苷元及稀有人参皂苷; 2,产物纯度高,最高可> 99.9%,特别有利于新药开发; 3,成本低,目前10L水平发酵的原料成本仅为5元左右/克产品; 4,产量高,且酵母是成熟的工程菌体系,产量进一步优化提升的潜力很大; 5,拥有自主知识产权,截至目前已经申请5项专利; 6,发酵过程安全可控,且避免了农药等任何外来污染; 7,不受植物原料来源的限制,避免了名贵天然资源的耗竭。

发布人:华东理工大学
标签: 生物合成  
发布时间:2017-12-20 11:10
CRISPR/Cas9 介导的大片段DNA 拼接方法

本发明公开了 CRISPR/Cas9 介导的大片段 DNA 拼接方法。具体而言,本发明提供能在酵母中组成型表达 Cas9 的核酸构建物,该核酸构建物含有与 cas9 基因操作性连接的酵母 Tef1 启动子,来自 pBR322 的复制起始位点及其筛选标记和来源于 CEN6 ARS4 的复制区及其筛选标记,所述核酸构建物在酵母中为单拷贝复制,在大肠杆菌中为高拷贝复制。本发明还提供能在酵母中组成型表达 sgRNA 的核酸构建物、作为受体载体使用的核酸构建物以及 DNA 拼接方法。利用本发明可将两个以上待拼接大DNA 片段直接在酵母菌中一次成功拼接为大质粒,省去了低效率的大片段 DNA 的体外酶切回收及遗传转化等操作,比传统方法更方便高效。

发布人:华东理工大学
标签:
发布时间:2017-12-16 16:34
一种用于丝状真菌Crispr-Cas系统的Cas9编码基因及其应用

本发明提供了用于丝状真菌 Crispr-Cas 系统的 Cas9 编码基因及其应用。具体地,本发明涉及一种适合于丝状真菌异源表达 Cas9 编码基因的密码子优化方案以及含有所述编码基因的表达载体和宿主细胞。本发明还涉及利用密码子优化 Cas9 基因构建 CRISPR/Cas 的基因组编辑方法。本发明的密码子优化方案,能有效的提高 Cas9 基因在丝状真菌的表达量,能成功的应用于 CRISPR/Cas的基因组编辑方法,给丝状真菌的分子改造带来极大的便利。

发布人:华东理工大学
标签: 微生物工程  
发布时间:2017-12-13 16:40
异源合成广霍香醇的方法和微生物

本发明涉及生物合成工程与微生物制造技术领域,提供了一种异源合成广霍香醇的方法和微生物。具体地,本发明提供了微生物异源合成倍半萜广藿香醇的方法,主要包括对广藿香醇合成酶的密码子优化,合成下游途径的组装与表达,微生物宿主萜类合成前体 IPP/DMAPP 的强化,最终实现广藿香醇在微生物体内的高效合成。

发布人:华东理工大学
标签:
发布时间:2017-12-12 11:13
一种新的整合酶及其在高效改造刺糖多孢菌中的应用

本发明提供了一种新的整合酶及其在刺糖多孢菌遗传改造中的应用。具体地,所述的整合酶 来自糖多孢菌CCTCCAA208003 (Saccharopolyspora endophytica),且所述的整合酶通过特定的顺式原件,可在刺糖多孢菌染色体特异性定点整合外源 DNA。此外,本发明人还通过刺糖多孢菌不同菌株遗传因子的研究发现了不同菌株来源的可在刺糖多孢菌内的自主游离复制区。基于本发明的整合酶以及复制区域序列构建载体可用于刺糖多孢菌的遗传改造,可能发现新型的多杀菌素类似物,也可能提高多杀菌素发酵产量。可通过质粒携带不同的抗性分子标记,用于刺糖多孢菌种间或者属间的基因组 shuffling 操作,实现高效基因组重排。

发布人:华东理工大学
标签: 先进技术  
发布时间:2017-12-02 16:28
一种真菌来源木聚糖酶及其编码基因及其高效异源表达

本发明涉及一种真菌来源的木聚糖酶、其编码基因及其高效异源表达。本发明还涉及含有所述编码基因的表达载体和宿主细胞。本发明还涉及利用所述木聚糖酶水解糖苷键的方法。本发明的木聚糖酶的酶活性高,经重组表达后产量高等特点,可良好地应用于工业生产。

发布人:华东理工大学
标签: 先进技术  
发布时间:2017-11-29 08:46
一种新型内切木聚糖酶及其编码基因和应用

本发明涉及一种新型木聚糖酶及其编码基因和应用。本发明还涉及含有所述编码基因的表达载体和宿主细胞。本发明还涉及利用所述木聚糖酶形成还原糖的方法。本发明的木聚糖酶具有高的酶活且在宽的 pH 范围内有良好的稳定性,可方便地应用于工业生产。

发布人:华东理工大学
标签: 先进技术  
发布时间:2017-11-27 16:47
一种元基因组来源的β-甘露聚糖酶、其编码基因及其表达

本发明提供了一种新型的β-甘露聚糖酶以及微生物发酵法或酶法生产该酶的方法。 所述酶的优点是可用于中性偏弱酸性及高温环境下,在60度、pH6.5时,酶比活为2625U/mg,因此可以很好地应用于饲料生产领域。β-甘露聚糖酶(mannan endo-β-1,4-mannosidase;EC 3.2.1.78)是一类降解甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖和半乳葡萄甘露聚糖的主链 β-1,4-D-甘露吡喃糖苷键的酶,它属于一种半纤维素酶,有着广泛的用途。国内外现主要用于造纸工业纸浆的漂白、油井的破胶、降解植物胶生产低聚糖用做双歧杆菌促生长因子,防病抗衰老、增强免疫的保健食品以及饲料添加剂。甘露聚糖酶降解甘露聚糖所产生的甘露低聚糖是一种生物化学益生素,可以改善肠道微生物组成,形成以双歧杆菌和乳酸菌为优势的肠道菌群。

发布人:华东理工大学
标签: 先进技术  
发布时间:2017-11-24 16:30
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